PRESERVACIÓN MODIFICADA Y DESCRIPCIÓN DE LA FUNGALISINA PARA BATRACHOCHYTRIUM DENDROBATIDIS

Abstract

Batrachochytrium dendrobatidis es un hongo patógeno que causa quitridiomicosis, una afección cutánea que resulta en la reducción de las poblaciones de anuros en todo el mundo, debido a las fungalisinas, su factor de virulencia más importante. Los mapas de B. dendrobatidis (http://www.bd-maps.net/) contienen la información sobre los aislamientos relacionados con B. dendrobatidis. Una alternativa disponible para la reconstitución de cepas de B. dendrobatidis es a partir de células criopreservadas, los métodos para esto se basan en el protocolo de la Organización Mundial de Sanidad Animal (OIE). Recientemente, gran parte del interés en la investigación de B. dendrobatidis se ha centrado en la secuenciación de su ADN, se encuentran disponibles los genomas de B. dendrobatidis JAM81 y B. dendrobatidis JEL423. OBJETIVO. Evaluar una forma modificada del protocolo de la OIE para la criopreservación de cepas de B. dendrobatidis y el análisis in silico de su fungalisina. Se modificó el protocolo de la OIE utilizando la cepa de B. dendrobatidis EV001, enfocado en los ítems de concentraciones de criopreservantes, antibióticos y recuperación, desde 􀀀80 C, y evaluación de viabilidad microscópica en agar hidrolizado con triptona y gelatina. Además se utilizó Bioinformática para la determinación de características bioquímicas de la fungalisina de la cepa de B. dendrobatidis JAM81. El protocolo modificado de la OIE resultó útil para la recuperación de la viabilidad de la cepa B. dendrobatidis EV001. La caracterización de la fungalisina de B. dendrobatidis JAM81 mostró un peso molecular de 85 kDa, punto isoeléctrico de 8,33 y estructura terciaria característica que indicó que la proteína es una metaloproteinasa, tiene un dominio PepSY para la inhibición de proteasas, y un dominio catalítico asociado a destrucción de barreras proteicas./Batrachochytrium dendrobatidis is a pathogenic fungus causing chytridiomycosis, a cutaneous affection resulting in reduction on Anura populations around the world, because of fungalysins, the most important virulence factor. The B. dendrobatidis maps (http://www.bd-maps.net/) is the dataset of information about the B. dendrobatidis -related isolates. An alternative available for reconstitution of B. dendrobatidis strains from cryopreserved cells include methods relying on theWorld Organization for Animal Health (OIE) protocol. Most recently, much of the interest in the B. dendrobatidis research has focused on its DNA sequencing, especially B. dendrobatidis JAM81 and B. dendrobatidis JEL423 genomes. OBJECTIVE. To evaluate a modified form from OIE protocol for B. dendrobatidis strain criopreservation, and in silico analysis of B. dendrobatidis fungalysin. OIE protocol was modified using B. dendrobatidis EV001, focused on cryopreservant concentrations, antibiotics and recovering to 􀀀80 C, and microscopic viability evaluation on Tryptone Gelatin hydrolyzed agar. Besides, Bioinformatics was used for the determination of biochemical characteristics from a B. dendrobatidis JAM81 fungalysin. Modified OIE protocol was useful by viability, recovering B. dendrobatidis EV001 strain. The characterization of B. dendrobatidis JAM81 fungalysin showed a molecular weight of 85 kDa, isoelectric point of 8.33, and tertiary structure among others. This indicated that the protein is a metalloproteinase, it has a PepSY domain for protease inhibition, and a catalytic domain that destroy protein barriers.