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Title: Clonación, secuenciación y caracterización molecular de genes codificantes de polifenol oxidasa (PPO) en Theobroma cacao L. (cacao) en el cantón Quevedo-Provincia de Los Ríos
Authors: Acosta Farías, Jenny Milena
Advisor: Chiluisa Utreras, Viviana Pamela
Keywords: BIOTECNOLOGÍA
CACAO
POLIFENOL OXIDASA(PPO)
MONILIOPHTHORA RORERI
Issue Date: Feb-2017
Abstract: En Ecuador, las plantaciones de cacao presentan bajos promedios de producción debido a la diversidad de patógenos, especialmente a la infección por Moniliophthora roreri (monilia). Se cree que existe una relación entre el ataque del hongo y el aumento de los niveles de expresión de genes codificantes de polifenol oxidasas (PPOs) como mecanismo de defensa ante patógenos y herbívoros en diferentes plantas. Para la identificación de genes que codifican para PPOs, se seleccionaron hojas de cacao Nacional, provenientes de plantas resistentes y susceptibles a monilia, ubicadas en la Finca Experimental La Represa, propiedad de la Universidad Técnica Estatal de Quevedo. Se afinó un protocolo de extracción de ARN total de alta calidad para hojas de cacao recalcitrantes. Después de su retrotranscripción a ADNc, se realizaron ensayos de amplificación por PCR con diferentes primers, diseñados a partir de secuencias conservadas de PPOs. Los productos de amplificación permitieron la identificación de un gen de 961 pb, similar a un gen que codifica para la PPO predictiva de PPO de Theobroma cacao depositada en NCBI (XP_017978715.1). La identificación de este gen, es fundamental para evaluar a futuro los niveles de expresión y cuantificación en diferentes estados de desarrollo del fruto. Dicha cuantificación permitirá proponer herramientas de control para monilia y construir las bases para el mejoramiento genético del cacao Nacional.
Description: In Ecuador, cocoa plantations often present low yields due to a great diversity of pathogens, especially Moniliophthora roreri (monilia), which cause a substantial infection. It is thought that the fungi attack and an uprising of expression levels of encoding polyphenol oxidases (PPOs) genes are related as a defense mechanism in the presence of pathogens and herbivores in different plants. In order to identify the encoding genes of PPOs, leaves of National cocoa, coming from resistant and susceptible plants were collected, located in “La Represa”, property of Universidad Técnica Estatal de Quevedo. An extraction protocol for total RNA for recalcitrant cocoa leaves was optimized. After its reverse-transcription to cDNA, amplifying PCR assays were performed with different primers, designed from conserved PPOs sequences. Amplifying products allowed to identify a gen of 961 bp, similar to a gene that encodes a predicted PPO from Theobroma cacao stored in NCBI (XP_017978715.1). In addition to identify the gen, it is fundamental to evaluate in the future expression levels and quantify them in different development fruit stages. This quantification will be important not only to propose tools for monilia control but also to enhance genetic improvement of National cocoa.
URI: http://dspace.ups.edu.ec/handle/123456789/14819
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